檢測植物elisa試劑盒操作步驟

檢測植物試劑盒操作步驟：

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 a50μl，再加入顯色劑 b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（od 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算和結(jié)果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值 0.15

陰性判定：樣品 od 值< 臨界值（cut off）者為金葡萄球菌腸毒素(se)陰性 陽性判定：樣品 od 值≥ 臨界值（cut off）者為金葡萄球菌腸毒素(se)陽性。