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          生物芯片開辟個性化診治前景

          發(fā)布時間: 2010-11-16  點擊次數(shù): 1603次

           

              盲區(qū)一:不知道乙肝病毒的局部點突變。臨床上同樣是乙肝,卻可以有不同的病毒點突變,找到不同的突變從而選擇不同的治療是生物芯片——乙肝病毒基因突變檢測體系的優(yōu)勢所在。乙肝病毒DNA有四個開放讀碼框,分別稱為S區(qū)、C區(qū)、X區(qū)和P區(qū),不同區(qū)域的突變直接影響著治療方式的選擇。比如,若患者S區(qū)基因發(fā)生突變,表明機體產(chǎn)生免疫逃避株,病人使用疫苗療效差或無效,這對患有乙型肝炎的孕婦來講至關(guān)重要。因為這類孕婦所分娩的嬰兒在接受乙肝疫苗免疫后很可能不產(chǎn)生保護性作用,可能在數(shù)年后仍會在接受乙肝疫苗免疫的情況下不知不覺地患上乙型肝炎,而且他們的預(yù)后一般不好。同樣,若患者P區(qū)基因發(fā)生突變,表明已經(jīng)出現(xiàn)拉米夫定耐藥,且病情易復(fù)發(fā),應(yīng)及時調(diào)整治療方案;若C區(qū)突變,表明人體通過干擾T細胞功能而影響干擾素應(yīng)答作用,病毒不易被清除;若患者X區(qū)基因突變,表明患者有可能是暴發(fā)性肝炎、進展性肝炎、慢性肝炎、肝硬化以及原發(fā)性肝癌等,應(yīng)當引起高度的重視。乙肝病毒基因突變檢測體系,可以準確地檢測出患者體內(nèi)乙型肝炎病毒的基因所發(fā)生的變化,從而幫助醫(yī)生針對不同的病人確定不同的用藥方案,而且可以讓醫(yī)生更好預(yù)測疾病的發(fā)展趨勢?! ?/p>

              盲區(qū)二:非“陰”即“陽”的化驗單,讓醫(yī)患看不到病毒清除效果,生物芯片則可以更加細化、直觀地顯示治療過程中病毒變化情況,從而增加醫(yī)患信心,避免中途放棄。“陽轉(zhuǎn)陰”是很多患者zui希望看到的,然而這個轉(zhuǎn)化過程往往需要幾個月甚至更久地堅持,面對一成不變的“陽性”結(jié)果患者很容易喪失了耐心,這一現(xiàn)象在病人自己用藥治療時更常見。其結(jié)果不但是可能已產(chǎn)生的療效由于檢驗方法的缺憾而終止,更為嚴重的是造成病毒的變異和病毒對機體產(chǎn)生耐受。  

               生物芯片技術(shù)可以針對乙肝病毒主要標志物進行系統(tǒng)分析,并轉(zhuǎn)化為更加直觀的化驗結(jié)果。例如,將檢測結(jié)果表現(xiàn)為從10個加號到0 個加號的不同狀態(tài),這樣當藥物治療有效時,盡管都是“陽性”,患者卻可以看到加號在逐步減少,當然也就會繼續(xù)堅持下去。  盲區(qū)三:傳統(tǒng)的方法只能檢測個別基因片段或指標,面對復(fù)雜的生物體,難免以偏概全。生物芯片對臨床醫(yī)學(xué)zui大的好處是可以對病原微生物進行多指標平行分析。傳統(tǒng)方法主要是對病原微生物進行單指標分析,如定量PCR是針對乙肝病毒的某個基因片段進行分析,乙肝兩對半則需進行5次試驗完成5個相互獨立的指標。乙肝病毒雖小,但所產(chǎn)生的生物信息卻非常巨大,較少的指標難免會產(chǎn)生以偏代全的錯覺。就好像人們常常用成語井底之蛙來表示某個人的見識少,同樣,如果我們用較少的指標來描述我們所要研究的對象,則也會像井底之蛙一樣只知道天黑或天明;如果我們用含大量信息的生物芯片來研究乙肝病毒,我們就是跳出深井的青蛙,除了會知道天黑或天明之外,我們還會發(fā)現(xiàn)天上有彩云、有星星、有閃電等豐富的景象。因此用生物芯片技術(shù)來評價乙肝病毒的清除情況,要比用傳統(tǒng)方法真實、可靠、安全和科學(xué)得多。  

              揪出結(jié)核耐藥真兇  

              結(jié)核分枝桿菌耐藥性的產(chǎn)生,給結(jié)核病的治療和預(yù)防控制帶來了巨大的困難,而結(jié)核分枝桿菌基因突變是引起耐藥性的主要方式。能夠同步分析4種基因突變的高通量靶向性基因分析技術(shù),可以指導(dǎo)人們查找具體的耐藥品種。系統(tǒng)篩查分析我國結(jié)核分枝桿菌耐藥相關(guān)基因突變類型及分布特點,可揭示耐藥性結(jié)核病的發(fā)生機理;向臨床方向擴展,可為結(jié)核病耐藥性基因診斷提供理論依據(jù)。研究表明,結(jié)核分枝桿菌katG、rpoB、embB和rpsL基因的點突變分別與結(jié)核分枝桿菌耐受異煙肼、利福平、乙氨丁醇和鏈霉素密切相關(guān)?! ?/p>

              生物芯片技術(shù),較之目前臨床常用的藥敏檢測方法,具有操作簡單、快速,成本較低,檢測結(jié)果準確性高等優(yōu)勢,在結(jié)核病患者耐藥性臨床診斷及臨床指導(dǎo)用藥中具有很大的應(yīng)用前景?! ?/p>

              早期預(yù)警富貴病  

              1973年發(fā)現(xiàn)的ApoE是脂類代謝、心血管疾病及老年性癡呆等的重要決定因子。通過生物芯片分析ApoE基因多態(tài)性,對于協(xié)助臨床疾病的診斷和風(fēng)險預(yù)測有重要的應(yīng)用價值?! poE基因具有多態(tài)性,形成三種主要的異構(gòu)體ApoE2、ApoE3、Ap oE4,進而呈現(xiàn)出不同的生理功能。研究發(fā)現(xiàn)ApoEε4基因是遲發(fā)性和散發(fā)性老年癡呆的危險因子,二者呈正相關(guān),且ε4使患者發(fā)病年齡下降,而ε2則具有保護作用。由于老年癡呆患者中大部分均為散發(fā)或遲發(fā)家族性,因此ApoEε4基因與老年癡呆的關(guān)聯(lián)就顯得很有意義。  

              另外,ApoE在動脈粥樣硬化中也發(fā)揮重要的作用。ApoE多態(tài)性與不同的高脂血癥(HLP)、冠心病發(fā)生危險性及家族傾向有關(guān)。一般認為ApoE4是脂代謝紊亂和冠心病的重要遺傳標記,可能是高膽固醇血癥和冠心病的主要遺傳易感因子。而ε2等位基因具有降低膽固醇作用,對冠狀動脈硬化有防護作用。此外,ApoE還與缺血性腦血管病、傳染病、腎病綜合征、糖尿病等發(fā)病危險性相關(guān)。  

              讓宮頸癌真正能預(yù)防  

              人乳頭瘤病毒(HPV)是zui重要、明確的致癌病毒之一,zui近炒得火熱的“宮頸癌疫苗”其實就是HPV疫苗,原因是99%以上的宮頸癌患者都存在HPV感染,可見HPV在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中起著決定性的作用,而針對HPV研制的TDI-FP基因檢測技術(shù)則可以快速檢測到 HPV,幫助人們預(yù)防宮頸癌。與其他癌癥不同,宮頸癌可以通過控制H PV的感染加以預(yù)防。近年國內(nèi)外普遍應(yīng)用脫落細胞防癌篩查,但查到細胞學(xué)改變的患者50%~80%已存在浸潤性宮頸癌。高危HPV感染及相關(guān)病變分子標志的監(jiān)測,對細胞學(xué)檢查正?;蚝水愖兤诎┌Y的預(yù)警、早期診斷、指導(dǎo)預(yù)防及治療、判斷預(yù)后極為關(guān)鍵?! 囊话愕膶m頸癌前病變發(fā)展成宮頸癌約需10年的過程,以定期進行HPV分型檢測補充取代傳統(tǒng)的細胞學(xué)普查,對細胞學(xué)正常及高危人群,對預(yù)警宮頸細胞癌變傾向,及時發(fā)現(xiàn)和預(yù)防、治療早期宮頸癌極為關(guān)鍵?! ?/p>

              采用TDI-FP基因檢測技術(shù),對HPV常見型進行全面、高通量檢測,檢測結(jié)果較單純雜交準確性更高;一次擴增反應(yīng)能完成8個常見高、低危HPV型檢測,計算機控制程序閱讀微孔板,一次檢測可完成384個樣品,適于大規(guī)模臨床篩選、檢測應(yīng)用,也為改進該類病毒感染相關(guān)疾病的診斷、預(yù)后判斷、防治措施的滯后和盲目性引進了新的技術(shù)手段?! ?/p>

              擴展篇  

              體細胞治療技術(shù)(俗稱細胞導(dǎo)彈),是目前*的應(yīng)用前景的治療技術(shù),尤其是對病毒性感染疾病、腫瘤、免疫缺陷等均表現(xiàn)出良好的治療效果。  

              在診療中,閻小君和研究小組用經(jīng)過尖銳濕疣疣體提取抗原來沖擊病人的樹突細胞,治療1000余例的尖銳濕疣病人,僅有不到10人復(fù)發(fā)。盡管如此,仍有一些疣體比較小的患者由于難以獲得足夠量的抗原,而不得不等到疣體長大才能治療。為了解決這一難題,研究小組又設(shè)計出具有病毒特征的多肽分子氨基酸組成序。經(jīng)過模擬試驗計算出特征更明顯的多肽序列后,用人工體外合成的方法將預(yù)定的多肽進行合成。經(jīng)過一系列復(fù)雜的動物和人體試驗,終于成功地篩選出一些具有HPV抗原活性的多肽。這樣,即便是疣體非常小的早期患者也可以接受治療了?! ?/p>

              在嘗試用細胞療法治療HPV獲得成功的基礎(chǔ)上,研究小組又在國內(nèi)創(chuàng)建了針對乙肝病毒耐藥和機體易感性分析的一套技術(shù)方法和技術(shù)平臺。2003年,在中國高等學(xué)校蛋白質(zhì)組學(xué)研究院的幫助下,終于找到了一批價值的多價位優(yōu)勢抗原表位肽(靶向肽)。這種多價位優(yōu)勢抗原表位肽和細胞因子的樹突狀細胞結(jié)合能在短時間內(nèi)“克隆”大量的淋巴細胞。“細胞導(dǎo)彈”療法,就是根據(jù)這一原理,從患者體內(nèi)采集出單核細胞,進行體外特殊培養(yǎng),使其發(fā)育成樹突細胞并大量擴增后與效應(yīng)肽或靶向肽結(jié)合,然后再回輸體內(nèi),成為專門攻擊殺傷乙肝病毒的“細胞導(dǎo)彈”。這種特殊的“導(dǎo)彈”能“瞄準” 乙肝病毒進行定向、定點殺傷,卻不會傷及“無辜”。實驗證明,這種細胞治療的關(guān)鍵物不僅能給細胞導(dǎo)彈提供準確的靶點,而且在清除乙肝病毒過程中有特定性、靶向性、主動式細胞免疫和細胞殺傷功能,可*殺滅血液中和肝細胞中的HBV病毒。在此基礎(chǔ)上形成了一套完整的治療性細胞制備技術(shù)和方法,組成了從設(shè)備和制劑的制造,采購質(zhì)控、評價體系和技術(shù)推廣的儲備?! ?/p>

              生物芯片技術(shù)向人們展示了一幅基因診斷和治療的美好前景,但其缺陷也是相當明顯的。首先是成本的問題,由于芯片制作的工藝復(fù)雜,信號檢測也需專門的儀器設(shè)備,一般實驗室難以承擔其高昂的費用。其次在生物芯片實驗技術(shù)上還有多個環(huán)節(jié)尚待提高,如在探針合成方面,如何進一步提高合成效率及芯片的集成程度,樣品制備的簡單化與標準化等。盡管芯片技術(shù)還存在這樣或那樣的問題,但隨著研究的不斷深入和技術(shù)的更加完善,生物基因芯片一定會在生命科學(xué)研究領(lǐng)域發(fā)揮越來越重要的作用?! ?/p>

              特色篇  

              實驗室里,比大拇指蓋稍大的生物芯片就是將影響和改變?nèi)祟愇磥砩畹纳衿嬷?。將幾個生物芯片放在檢測器上,與之相聯(lián)的電腦屏幕上立刻就會出現(xiàn)縱橫交錯的紅綠熒光點。每一個熒光點就是一個基因片斷的點陣。只要取病人的一滴血放在芯片檢測卡上,經(jīng)過分子雜交后,電腦就會顯示基因的變化情況。再通過計算機把基因語言翻譯成醫(yī)生能讀懂的信息,便可對疾病做出準確的診斷。這種生物芯片的誕生,標志著疾病的診斷將由細胞和組織水平推進到基因水平。  

              20世紀80年代末,生物學(xué)家發(fā)現(xiàn)人類的許多疾病是由人體基因排列順序的變異所致。1993年,美國埃菲公司的科研人員受電腦芯片的啟發(fā),把已知排列順序的基因片段像晶體管一樣集成到硅片表面,通過特殊的觀察手段,終于在短時間內(nèi)辨認出了基因的變化。由此引發(fā)了繼工業(yè)革命、信息技術(shù)革命后的第三次基因組革命?! ?/p>

              診斷——方便快捷 質(zhì)優(yōu)價廉  

              生物芯片作為一種先進的大規(guī)模、高通量檢測技術(shù),在感染性疾病、遺傳性疾病和腫瘤的臨床診斷方面具有*的優(yōu)勢。它可以在一張芯片同時對多個病人進行多種疾病的檢測,盡管單張芯片的價格并不便宜,但可以同時檢測多個基因,因此整體診斷價格比傳統(tǒng)診斷方法要低一些。對于患者來說,僅僅需要一點血液就可以一次檢測多個基因,方便程度不言而喻。對于醫(yī)生來說,生物芯片能檢測病原微生物的耐藥性,病原微生物的亞型,且具有*的靈敏性和可靠性,自動化程度高,是他們工作中理想的助手。zui后,通過生物芯片診斷,無需機體免疫應(yīng)答反應(yīng),診斷速度比一些傳統(tǒng)方法快了許多?! ≈委?mdash;—處方 療效直觀  生物芯片催生了處方,實現(xiàn)了個性化用藥。個性化醫(yī)療zui激動人心之處在于基因與醫(yī)療的交叉。針對不同的病人和同一個病人的不同患病時期,能夠制訂zui恰當?shù)闹委煼桨浮! ?/p>

              在療效評價方面。與傳統(tǒng)方法相比,生物芯片可以對病原微生物進行多指標平行分析。現(xiàn)行的病毒分析方法使醫(yī)生在給病人某一種藥物的治療方案時,常常由于無法快速見到變化或起伏不定的結(jié)果而前功盡棄。  

              此外,在藥物篩選和新藥開發(fā)方面。生物芯片技術(shù)具有高通量、大規(guī)模、平行性地分析基因表達或蛋白質(zhì)狀況(蛋白質(zhì)芯片)的能力。用芯片作大規(guī)模的篩選研究可以省略大量的動物實驗甚至臨床實驗,縮短藥物篩選所用時間?! ?/p>

              在基因功能研究方面。生物芯片在基因組學(xué)、后基因組學(xué)和藥物基因組學(xué)研究中起著重要的作用。它可以開展包括DNA測序、基因表達檢測、尋找新基因、雜交測序、基因突變和單核苷酸多態(tài)性分析以及基因文庫作圖等研究。黑色素瘤生長刺激因子就是通過生物芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)的?! ?/p>

              在健康查體方面。它能同時對多個遺傳突變進行搜尋、加快功能基因組的研究進程。例如,體檢者在醫(yī)院用傳統(tǒng)方法檢測肝炎病毒,大約要等兩天才能拿到結(jié)果,而利用生物芯片技術(shù)不到五分鐘就可以拿到結(jié)論。

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